Преимплантационное генетическое тестирование: современная диагностика

Генетическая диагностика как совершенный метод

Конечно, самый большой страх женщины, это родить генетически нездорового малыша. Метод ПГД позволяет отсеять генетически больных эмбрионов, тем самым сразу дает ребенку здоровье. Родителям не приходится бояться за здоровье долгожданных детей. Если кто-то полагает, что генетические исследования делают ребенка по шаблону, то это не так. Нельзя сотворить дизайнерский проект будущего младенца. Характер и индивидуальность совсем не зависят от полученных генов. Даже клонированные искусственным путем животные не схожи друг с другом. Гены отвечают за внешние данные.

ЭКО совместно с ПГД сильно повлияло на приговор «бесплодны». Точнее, это уже не приговор, а особенное заболевание, которое легко обходится с помощью ЭКО. Метод позволяет преодолеть ряд трудностей со здоровьем, а именно:

• Непроходимость маточных труб.
• Отсутствие маточных труб.
• Истощение яичников.
• Отсутствие длительное время процесса овуляции.
• Нарушение работы яичников.
• Спайки в малом тазу.
• Отсутствие половых желез.

Даже, если у женщины отсутствует матка, проблему все равно можно решить. Но при этом яичники ее должны нормально функционировать. Для этого у женщины забирают яйцеклетки, оплодотворяют их спермой супруга и помещают зародыш в тело другой женщины (например, родственницы или суррогатной матери).

ПГД абсолютно безопасная процедура. Процедуру диагностики делают на максимально малом сроке, когда из каждой забранной клетки может получиться полноценный организм. Вреда здоровью эмбриона не будет, соответственно, будущий ребенок так же будет здоров.

Генетика продолжает развиваться. Она позволяет заранее получить здоровое потомство и будущих родителей, у которых с большей вероятностью будут отсутствовать генетические заболевания. Взрослый человек реально оценивает будущее, он заранее хочет дать малышу полноценную жизнь и в дальнейшем от него получить потомство (внуков). Генетика в этом, безусловно, помогает.

Итак, метод предимплантационной генетической диагностики является дополнением ко всей программе ЭКО

Не стоит обращать внимание на стоимость процедуры. Если уже найдены деньги на само ЭКО, то остальные необходимые средства – это мизер

Здоровье ребенка не стоит такой экономии.

Какие гормональные препараты вы принимали для стимуляции овуляции?

Poll Options are limited because JavaScript is disabled in your browser.

Цели ПГД

Как уже говорилось выше, ПГД проводится с целью выявления у эмбрионов генетических заболеваний, не поддающихся лечению. И к таким заболеваниям относятся:

• муковисцидоз;
• миопатия;
• торзионная дистония;
• синдром Дауна;
• ахондроплазия и прочие.

Помимо этого, ПГД может определить не только больных эмбрионов, то есть тех, которые после полного формирования родятся уже родятся с патологиями, но также и эмбрионов, которые имеют предрасположенность к тяжелым заболеваниям. То есть они могут развиваться и формироваться по всем нормам, а после рождения любой раздражитель может спровоцировать развитие патологий. Также при помощи ПГД производится «отсев» эмбрионов с аномалиями кариотипа.

Большинство генетических заболеваний имеют половую принадлежность. При помощи данной процедуры можно заранее определить пол будущего ребенка, чтобы предотвратить дальнейшую передачу патологий.

Также ПГД является отличных методом для проведения HLA – типирования, позволяющее осуществлять подбор будущего ребенка, который сможет стать донором для имеющегося уже больного ребенка.

Резус-фактор также предоставляется возможным определить при проведении молекулярно-биологического тестирования. А это позволяет предотвратить рождение ребенка с гемолитическим заболеванием.

Что дальше?

В последние годы наблюдается тенденция к значительному увеличению возраста, при котором женщины стремятся иметь ребенка. Однако способность к естественному зачатию с возрастом резко снижается, что связано с большим числом хромосомных нарушений в их яйцеклетках. Организм сопротивляется наступлению беременности больным ребенком, поэтому оплодотворение и имплантация происходят редко, и при этом риск рождения ребенка с хромосомными дефектами очень велик. Тот же механизм «выбраковки» дефектных яйцеклеток и эмбрионов срабатывает и при использовании методов искусственного оплодотворения, поэтому частота наступления беременности после ЭКО у женщин старше 38 лет значительно ниже, чем у более молодых женщин.

В тех случаях, когда немолодая женщина во чтобы то ни стало хочет родить ребенка, ей также рекомендуется прибегнуть к преимплантационной диагностике. Если яичники женщины отреагировали на стимуляцию, полученные у нее яйцеклетки проверяют на наличие хромосомных дефектов, отбирают только нормальные, оплодотворяют их и образовавшиеся эмбрионы переносят в матку. Оказалось, что частота наступления беременности при таком подходе у пожилых женщин вполне сравнима с таковой у молодых. В данном случае преимплантационная (хромосомная) диагностика помогает решить сразу две задачи: исключить вероятность рождения больных детей и резко повысить вероятность наступления беременности.

Хотим подчеркнуть, что преждевременно нельзя делать заключение о безопасности, безвредности как используемых методов лечения бесплодия, так и последующей беременностидля пожилых женщин. Однако в тех случаях, когда они принимают такое решение, преимплантационная диагностика хромосомных нарушений является самым разумным подходом.

К сожалению, цена ПГД достаточно высока, а исследование проводится не во всех клиниках даже Москвы, то есть она доступна пока еще очень небольшому числу нуждающихся в ней семейных пар. Поэтому необходимо соблюдать главное правило:

Независимо от способа зачатия, если беременность наступила у женщины старше 35 лет, она должна пройти пренатальную диагностику.

ПГД: как проводится?

Проведение ПГД является возможным только при ЭКО ИКСИ, которая подразумевает помещение активного сперматозоида в полость яйцеклетки, тем самым ускоряя процесс оплодотворения. При иных способах экстракорпорального оплодотворения яйцеклетки помещают в одну емкость со сперматозоидами.

А это не очень удобно для проведения ПГД, так как при заборе эмбриона на тест, в биологическом материале могут присутствовать сперматозоиды, не участвующие в процессе оплодотворения. Это может привести к тому, что данные ПГД будут являться не достоверными.

Перед проведением молекулярно-биологического теста, оба родители должны обследоваться в медицинских учреждениях для выявления генных дефектов. В случае, если характер генетических заболеваний в ходе исследований не был выявлен, ПГД не проводится.

Предимплантационный генетический анализ может проводится на разных этапах развития эмбриона. В случае если передача генетических заболеваний наблюдается по женской линии, то для проведения теста потребуются только яйцеклетки.

В лабораторных условиях их исследуют и при обнаружении здоровой яйцеклетки ее оплодотворяют и пересаживают в полость матки женщин. Такой тест проводится только на стадии зиготы.

Анализ может проводиться и на стадии деления эмбриона. То есть, яйцеклетки оплодотворяются в лабораторных условиях, а на пятый день среди них выбирают только здоровые и имплантируют в полость матки.

И если результаты, полученные на стадии дробления эмбриона, специалистам покажутся сомнительными, их пересаживание в матку не происходит. Врачи дожидаются периода, когда эмбрион будет находится на стадии бластоцисты и проводят диагностику повторно. А уже от полученных результатов зависит, будет ли эмбрион помещаться в полость матки или нет.

Когда нужно делать ПГД

Пройти предимплантационную генетическую диагностику предлагают не каждой паре, решившей сделать ЭКО. Существует ряд показаний, при которых эта процедура рекомендована.

А именно:

• У супругов есть «дефектные» хромосомы, имеются моногенные аномалии либо выявлена хромосомная перестройка.
• Возрастная пара (женщина старше 35 лет, мужчина — после 40 лет). Чем взрослее пара, тем вероятнее рождение малыша с генными аномалиями, даже если у супругов не наблюдаются «неисправные» хромосомы.
• Предыдущие беременности заканчивались смертью новорожденных из-за резус-конфликта.
• Исследование яйцеклеток и сперматозоидов выявило наличие дефектных ген и хромосом.
• Неудовлетворительный результат спермограммы. Выявлены серьезные нарушения, такие как азооспермия или олигозооспермия.
• В предыдущих протоколах ЭКО беременность не наступала.
• Беременность прерывалась на ранней стадии развития эмбриона.

Чем старше пара, тем с большей необходимостью нужно делать ПГД.

Поскольку список генетических заболеваний довольно внушительный, диагностику при ЭКО рекомендовано проводить всем пациенткам старше 35 лет. Возрастные изменения нередко грозят неприятными «неожиданностями» во время беременности, даже если зачатие произошло естественным путем.

Ускоренное старение женского организма и ПГД

Существуют ситуации, при которых женский организм «стареет» гораздо быстрее в биологическом смысле. Ускоренному старению женского организма способствуют определенные факторы. Вот некоторые из них:

• длительный прием сильнодействующих лекарственных средств;
• нездоровый образ в жизни в прошлом (курение, алкоголизм, наркомания);
• хронические заболевания;
• вредные условия работы;
• плохая экологическая обстановка.

ПГД также необходима, если:

• Необходимо получение определенных стволовых клеток для лечения других детей в семье.
• Мужчина и женщина являются близкими родственниками.
• Супруги получили долю радиационного облучения.

Стоимость протокола ЭКО с ПГД значительно выше, чем без процедуры, поэтому решение о проведении диагностики принимается пациенткой самостоятельно. Необходимо учитывать, что всего в 20-40%  случаев подсадка эмбриона заканчивается беременностью (в зависимости от возраста пациентки).

ПГД позволяет не только выявить генные мутации у зародыша, но и повысить вероятность успешной подсадки (до 70%, в зависимости от возраста).

Какие заболевания выявляет ПГТ?

• моногенные – в данную группу входит гемофилия, амиотрофия, муковисцидоз, мукополисахаридозы, фенилкетонурия и другие наследственные патологии, в основе которых лежит единичная генная мутация;
• хромосомные транслокации – так называют патологический процесс (тип хромосомной мутации), когда части двух хромосом перестраиваются (обмениваются участами), словно меняясь местами. При условии равноценного обмена, когда хромосомы равны по размеру и разрывов в цепи не возникает, такая особенность у человека внешне никак не проявляется. Но при этом существует огромный риск развития различных нарушений у следующих поколений. Чем больше перестроенная часть хромосомы, тем серьезнее возможные патологии плода. Установить данную аномалию возможно только в лабораторных условиях, поэтому многие люди, абсолютно здоровые на первый взгляд, могут родить больного ребенка или пройти через несколько выкидышей.

Разновидности ПГТ

1. ПГТ-А (преимплантационное генетическое тестирования на анеуплоидии) — для обнаружения количественных аномалий (для обнаружения увеличения или уменьшения количества хромосом эмбрионов);
2. ПГТ-СР (преимплантационное генетическое тестирования на структурные нарушения) — для обнаружения структурных аномалий одной или нескольких хромосом, то есть аномалии, вызванные разрывом или неправильным соединением хромосомных сегментов: транслокации, делеции, дупликации, инсерции, кольцевая хромосома или инверсии.
3. ПГТ-М (преимплантационное генетическое тестирования на моногенные заболевания) — для обнаружения мутаций или нарушений в последовательности ДНК одного гена.

Показания к прохождению

Некоторые пары самостоятельно принимают решение о необходимости генетического тестирования, чтобы исключить возможные риски. Показаниями к прохождению ПГТ могут стать:

• возраст женщины: 35 лет и старше;
• два или больше спонтанных абортов;
• два или больше неудачных цикла ЭКО;
• нарушения мейоза сперматозоидов или низкое количество сперматозоидов в эякуляте;
• предыдущие беременности с хромосомными нарушениями;
• неудачные имплантации эмбрионов;
• бесплодие неясного генеза;
• наличие подтвержденных у родителей, либо у родственников структурных перестроек в хромосомах, либо наличие детей в семье с генетическими заболеваниями;
• носительство мутаций генов (моногенные заболевания).

Проведение ПГТ

В клинике ВРТ «Дети из пробирки» ПГТ проводят как на 6-8 клеточной стадии развития эмбриона, то есть на 3 сутки, так и на 5 день развития эмбриона, на стадии так называемой бластоцисты . Для этого выполняется биопсия с помощью высокоточного лазерного оборудования. Эмбриолог делает специальные насечки на оболочке, которая окружает эмбрион, и на определенной стадии забирает бластомер либо клетки трофэктодермы для исследования, в зависимости от суток развития эмбриона.

Генетическое тестирование проводится на очень раннем этапе. Манипуляции не наносят ущерба состоянию эмбриона, следовательно, и здоровью будущего ребенка.

Однако, необходимо понимать, что ПГТ не дает 100% гарантии на наступление беременности. Оно лишь сокращает риски рождения долгожданного малыша с генетическими и хромосомными заболеваниями.

Диагностика каких заболеваний проводится?

С помощью ПГД проводится диагностика огромного количества различных заболеваний. Это хромосомные или моногенные патологии. Диагностика проводится как эмпирически, так и целенаправленно. Эмпирическая диагностика используется в случаях, когда у родителей или их родственников не обнаружены какие-либо наследственные заболевания. Тогда эмбриологи ищут те болезни, что чаще всего встречаются. В иных случаях путем генетического консультирования врачи устанавливают, что родители могут быть носителями генов:

• муковисцидоза;
• гемофилии;
• фенилкетонурии;
• тугоухости;
• серповидно-клеточной анемии;
• миодистрофии Дюшенна;
• болезни Гоше и т.д.

Количество генных заболеваний, на которые проводится обследование эмбриона, исчисляется сотнями.

Все пары исследуют на хромосомные аномалии. Это могут быть лишние или недостающие хромосомы, изменение их положения, обмен фрагментами генетического материала, отсутствие частей хромосом и т.д.

Наиболее частые патологии – это синдромы Патау, Дауна, Эдвардса, кошачьего крика, Клайнфельтера, Шерешевского-Тернера, Прадера-Вилли.

Когда проводится генетическая диагностика?

Исследоваться могут разные части женских половых клеток или эмбрионов. Используются три подхода:

• Исследование полярных телец. Это клеточные образования, возникающие при созревании ооцита. Они не играют роли в оплодотворении. Поэтому полярные тельца без ущерба для яйцеклетки могут быть удалены и исследованы. Метод позволяет получить информацию о хромосомном наборе женской гаметы. Но он не гарантирует полноценности генетического материала эмбриона.
• Исследование бластомера. Клетку эмбриона берут на 3 день его развития. В это время он имеет обычно от 6 до 8 клеток (бластомеров). Исследование позволяет определить большинство мутаций. Но имеет одно слабое место – не может быть определен мозаицизм. Это мутация, при которой разные клетки несут разный генетический материал.
• Исследование трофэктодермы. Это клетки эмбрионального происхождения, из которых образуется внешняя оболочка эмбриона. Данный способ диагностики проводится на 5 день, когда эмбрион пребывает на стадии бластоцисты. В этом случае ПГД при ЭКО может обнаружить и мозаицизм, потому что исследуются сразу несколько клеток. Но недостатком такой диагностики является необходимость заморозки эмбрионов, потому что анализ проводится от 1 до 3 дней. Таким образом, перенос приходится откладывать на следующий цикл. Впрочем, хотя это оборачивается дополнительными и финансовыми затратами для пары, на вероятность беременности влияние криоконсервации эмбрионов – только положительное. В криоцикле больше шансов забеременеть, чем в «свежем» цикле, потому что врачам удается добиться наилучшей синхронизации состояния эндометрия и стадии развития эмбрионов.

Таким образом, ПГД при ЭКО можно проводить до оплодотворения, на 3 день развития эмбриона, а также на 5 дней. На практике чаще всего используют последний вариант. Потому что на 5 день исследование будет наиболее достоверным и информативным.

Почему возникают мутации?

Мутации – не такое редкое явление, как многие считают. Около 70% эмбрионов не реализуются в беременность именно по причине генетических дефектов. Чаще всего после оплодотворения такая яйцеклетка погибает до имплантации. То есть, она не встраивается в стенку матки. Если же это происходит, велик риск самопроизвольного аборта. На определенном этапе плод перестает развиваться. Это обычно происходит в первом триместре, когда закладываются основные органы и ткани. Реже хромосомные мутации оказываются совместимыми с жизнью. Тогда у пары рождается больной ребенок.

Причины мутаций – это нарушение процесса дозревания яйцеклеток или сперматозоидов. В 85% случаев дефектные гены несут женские клетки, ещё в 15% – мужские. Причина заключается в том, что яйцеклетка – более сложная структура. Поэтому при её производства у организма больше шансов допустить ошибку.

Мутации могут быть спонтанными или наследуемыми. Хромосомные мутации обычно спонтанные. По наследству они передаются очень редко. А вот генные – наоборот, чаще наследуются. Таких заболеваний существует огромное количество. Проверить эмбрион на их все невозможно. Поэтому перед ПГД супружеская пара проходит генетическое консультирование, чтобы знать, какие именно болезни следует искать.

Когда риск генетических проблем у ребенка считается высоким?

Процедура ПГД не выполняется всем подряд. Её делают только тем, когда относят в группу. Таких групп две:

• родители, которые могут передать ребенку наследственную патологию;
• высокий риск образования анеуплоидных гамет при нормальном кариотипе.

ПГД при ЭКО всегда проводится носителям генных и хромосомных аномалий. Существует очень большая вероятность, что они будут переданы ребенку. Поэтому при проведении ПГД при ЭКО многие эмбрионы будут отбракованы. Их не станут переносить в матку. Соответственно, не родятся дети с генетическими или хромосомными мутациями, которые напрямую наследуются от родителей.

В число заболеваний, при которых делают ПГД эмбриона, входят:

• моногенные болезни: (аутосомно-рецессивные, аутосомно-доминантные, сцепленные Х‑ или Y половой хромосомой);
• структурные или числовые аберрации хромосом.

Пациенты с подозрением на мутации в хромосомах подлежат обследованию у генетика. Многие хромосомные патологии обнаруживаются в анализе крови, которые супруги могут сдать в случае повторяющихся неудачных ЭКО или привычных выкидышей. Однако иногда они в ходе генетической диагностики не выявляются. Бывают случаи механицизма – когда часть клеток у человека имеют хромосомные аберрации, а другие нормальные. В такой ситуации поможет консультация генетика, исследование материала абортусов или эмбрионов.

Вторая группа пациентов, нуждающихся в предимплантационной генетической диагностике, это люди с высоким риском по образованию анэуплоидных гамет. При этом у них может сохраняться нормальный соматический кариотип. То есть, набор хромосом в неполовых клетках соответствует норме.

Такую генетическую диагностику называют предимплантационным скринингом. В ходе ПГД при ЭКО у всех эмбрионов считают количество хромосом, определяют их структуру. В разных клиниках используются разные диагностические подходы. Число хромосом, на которые проводят ПГД при ЭКО, может быть различным. Проверяют от 8 до 22 пары. При проведении генетической диагностики на меньшее количество хромосом проверяются те из них, в которых мутации бывают чаще всего. Если же используется максимальное исследование, оно может стоить дороже, но обнаруживает даже те аберрации, которые наблюдаются реже.

Установлено, что исследование всего 5 пар хромосом в ходе ПГД при ЭКО позволяет обнаружить 40% всех мутаций у эмбрионов, достигших стадии бластоцисты. Оценка состояния 12 хромосом обнаруживает 90% хромосомных перестроек.

В группу высокого риска по анэуплоидиям входят по возрасту, отягощенному анамнезу (неудачные ЭКО, выкидыши) или результатам спермограммы (тяжелые нарушения с выраженной олигоастенотератозооспермией с высокой вероятностью приведут к хромосомным аберрациям у плода). Поэтому такие пациенты нуждаются в генетической диагностике. Перед тем как направлять супругов на ПГД при ЭКО, стоит сделать анализ кариотипа.

На генетический скрининг приходится около 60% всех проводимых в мире ПГД при ЭКО. Эта процедура имеет высокую эффективность, так как многие неудачные попытки искусственного оплодотворения и минимум 50% всех выкидышей ранних сроков обусловлены именно хромосомными аберрациями эмбрионов.

Стоимость генетической диагностики

ЭКО требует серьезных трат. Генетическая диагностика увеличивает цену в разы, так как оборудование и материалы для процедуры очень дорогие.

Дать однозначный ответ, сколько стоит ПГД, нельзя, так как цена исследования зависит от нескольких факторов:

• Метода диагностики;
• Количества исследованных эмбрионов;
• Использование дополнительных тестов;
• Исследование транслокаций хромосом.

Цена диагностики зависит и от количества исследуемых аномалий.

В Москве стоимость ПГД одного эмбриона – от 25 000 до 30 000 рублей. За комплексное обследование нужно заплатить от 100 000 до 250 000 рублей.

Полезная информация

ПГД рекомендовано:

• При бесплодии, привычном невынашивании беременности
• При неоднократных неудачных попытках ЭКО
• При возрасте женщины старше 35 лет
• При наличии высокого риска передачи наследственных заболеваний

Техника выполнения ПГД

Для проведения преимплантационной генетической диагностики эмбрионам проводится биопсия на 3 день (биопсия бластомера) или на 5 день (биопсия трофэктодермы) их развития.

На третий день развития эмбрион, как правило, состоит из восьми бластомеров (клеток). Биопсия эмбриона на данной стадии представляет собой отделение одной клетки от эмбриона. При этом существует риск повреждения эмбриона, что влечет за собой снижение потенциала его дальнейшего развития. Кроме того, на этой стадии эмбрионы имеют высокий уровень мозаицизма (до 55%), то есть наличия хотя бы одной клетки, отличающейся по хромосомному набору (генетическому составу) от остальных, что обуславливает риск ложнопложительных и ложноотрицательных результатов диагностики.

Более распространенной в современной практике является биопсия эмбриона на пятый день развития. В этот момент эмбрион уже находится в стадии бластоцисты (ранней стадии развития зародыша), состоящей из двух слоев клеток: внутриклеточной массы и трофэктодермы. Впоследствии трофэктодерма участвует в образовании плаценты, а внутриклеточная масса — в образовании плода. В процессе биопсии эмбриолог с помощью микроинструментов забирает сразу несколько клеток трофэктодермы, внезародышевой ткани. Это существенно снижает риск повреждения эмбриона, риск наличия мозаицизма, получения ложноположительных и ложноотрицательных результатов исследования, обеспечивает безопасность процедуры и повышает точность диагностики.

Оборудование для проведения безопасного ПГД

В Доме Планирования Семьи отдается преимущество проведению биопсии эмбрионов на 5 день. Техника проведения такой биопсии требует от эмбриолога значительного опыта и наличия высококлассного оборудования в лаборатории.

Биопсия проводится экспертами-эмбриологами на современном и надежном оборудовании — инвертированном микроскопе Olympus, оснащенном микроманипуляторами Narishige и активным лазером OCTAX NaviLase. При проведении PGD этот лазер позволяет максимально точно и безопасно отделить одну или несколько клеток (биоптат) от эмбриона. OCTAX NaviLase минимизирует вредное воздействие на клетку за счет низкой инвазивности и минимального облучения, и является предметом гордости Эмбриологической лаборатории клиники.

Точность предимплантационной диагностики

Генетический анализ на хромосомный набор может выполняться разными методами, в числе которых метод FISH (флуоресцентная гибридизация in situ), aCGH (метод сравнительной геномной гибридизации) и NGS (метод полногеномного секвенирования). Наша Клиника использует только самые современные методы aCGH и NGS, обеспечивающие информативные и надежные результаты. Слаженная работа команды репродуктологов, эмбриологов и генетиков позволяет достичь высокий процент наступления беременности в Клинике.

Стоимость преимплантационной генетической диагностики

Указаны цены на самые востребованные услуги со скидкой 30%, которая действует при оплате наличными или банковской картой. Вы можете обслуживаться по полису ДМС, оплачивать отдельно каждый визит, заключить договор на программу ЭКО или внести депозит и получать услуги со скидкой. Услуги оказываются на основании заключенного договора.

Принимаются к оплате пластиковые карты MasterCard, VISA, Maestro, МИР. Также доступна бесконтактная оплата картами Apple Pay, Google Pay и Android Pay.